¹è°æ ¹× ¿ø¸®
¼¼±ÕÀÇ ¹è¾ç¾×¿¡ ÀÏÁ¤ÇÑ ÆÄÀåÀÇ ºûÀ» Åë°ú½ÃÄ×À» ¶§ ¿ë¾×Àº ±× ºûÀ» Èí¼ö(ȤÀº »ê¶õ)½Ãų ¼ö°¡ ÀÖ°í, À̶§ Èí¼öµÈ ºûÀÇ ¾çÀº ¿ë¾×ÀÇ ¼¼Æ÷³óµµ¿¡ ºñ·ÊÇÔÀ» ÀÌ¿ëÇÑ °ÍÀÌ´Ù. ºÐ±¤±â¿¡¼ ½Ã·á¸¦ Åõ°úÇÑ ºûÀÇ ¼¼±â´Â ½Ã·á ¼ÓÀÇ ±Õü¼ö¿¡ ¹Ýºñ·ÊÇÑ´Ù. µû¶ó¼ ¿©·¯ °¡Áö ºñÀ²·Î Èñ¼®µÈ ¹è¾ç¾×ÀÇ Èí±¤µµ(Optical Density, O.D.)¸¦ Àé ´ÙÀ½ °¢ Èí±¤µµ¿¡¼ÀÇ Á¤È®ÇÑ ¼¼Æ÷ ¼ö¸¦ ¾Ë¾Æ³»¾î À̵éÀÇ »ó°ü°ü°è¸¦ ±¸ÇØ ³õÀ¸¸é Èí±¤µµ ÃøÁ¤¸¸À¸·Îµµ ¹ÌÁöÀÇ ±Õü ¼ö¸¦ ¾Ë¾Æ³¾ ¼ö ÀÖ´Ù.
½ÇÇè µµ±¸(Áغñ¹°)
SpectraAcademy 1 ´ë Cuvette cell 1 °³ Escherichia coli ¹è¾ç¾×(6½Ã°£ ÀÌ»ó ¹è¾ç) LB broth ¹èÁö(LB agar ¹èÁö(LB broth ¹èÁö¿¡ Agar 15/§¤ ÷°¡)) ¹«±Õ´ë ¸ê±ÕµÈ ÇÇÆê ¸ê±ÕµÈ ºó ½ÃÇè°ü(Èñ¼®¿ë) ¸ê±ÕµÈ Áõ·ù
½ÇÇè ¹æ¹ý
°¡. Sample Áغñ 1) ¸ê±ÕµÈ »óÅÂÀÇ ¹èÁö 100 mL¿¡ Escherichia coli ¹è¾ç¾× 1 mL¸¦ Á¢Á¾ÇÏ¿© Ű¿î´Ù.(37 ¡É,200rp m). 2) Á¢Á¾ ÈÄ 4½Ã°£ µ¿¾È 0 timeÀ» Æ÷ÇÔÇÏ¿© ¸Å 30ºÐ¸¶´Ù ½Ã·á¸¦ ¹«±ÕÁ¶ÀÛ ¹æ¹ýÀ¸·Î äÃëÇÏ¿© Èí±¤ µµ ÃøÁ¤ ¹× ÄÝ·Î´Ï °è¼ö¹ýÀ» ¼öÇàÇÑ´Ù. ³ª. SpectraAcademy¸¦ ÀÌ¿ëÇÏ¿© Èí±¤µµ(Optical Density or Absorbance) ÃøÁ¤ 1) SpectraAcademy¸¦ Èí¼ö/Åõ°ú¸ðµå·Î ¹è¿ÇÑ´Ù. 2) SpectraAcademy¿Í PC¸¦ USB cableÀ» ÀÌ¿ëÇÏ¿© ¿¬°áÇÑ ÈÄ,¡°Go¡±¹öưÀ» Ŭ¸¯ÇÏ¿© ÃøÁ¤À» ½ÃÀÛÇÑ ´Ù. 3) Light source¿¡ Àü¿øÀ» ¿¬°áÇϰí, Àü¿ø ½ºÀ§Ä¡¸¦ ON ½ÃŲ´Ù. ±×¸®°í UV/VIS Àü¿øµµ ON ½ÃŲ´Ù. 4) ±¤¿øÀÇ ¾ÈÁ¤È¸¦ À§Çؼ, UV/VIS Àü¿øÀ» ON½ÃŲ »óÅ¿¡¼ 30ºÐ°£ ¿¹¿ÇÑ´Ù. 5) SpectraAcademyÀÇ SWÀÎ VisualSpectra 2.1 SrÀ» ½ÇÇàÇÑ´Ù. 6) UV/VIS ±¤¿øÀ» ONÀ¸·Î ³õ°í, Shutter¸¦ OFF ½ÃŲ´Ù. 7) ÀûÀýÇÑ Integration time, Average, Boxcar µîÀ» Á¶ÀýÇÑ ÈÄ, "DARK" ¹öưÀ» Ŭ¸¯ÇÏ¿©, Dark Spe ctrumÀ» ÃøÁ¤ÇÑ´Ù. 8) 7)°ú µ¿ÀÏÇÑ ¼³Á¤À¸·Î Çϰí, ¸ê±ÕµÈ µ¿ÀÏ ¹èÁö·Î Reference¸¦ ÃøÁ¤ÇÑ´Ù. VisualSpectra 2.1 Sr ¿¡¼ "REFER" ¹öưÀ» Ŭ¸¯ÇÔÀ¸·Î½á, Reference¸¦ ÃøÁ¤ÇÒ ¼ö ÀÖ´Ù. 9) ¸Å 30 ºÐ ¸¶´Ù ¹«±Õ Á¶ÀÛ ¹æ¹ýÀ¸·Î ½Ã·á¸¦ äÃëÇÏ¿©, ½ºÆåÆ®·³À» ÃøÁ¤ÇÑ´Ù. ÀÌ ¶§, 0ºÐ¿¡¼ÀÇ OD(Optical Density) 600Àº 0.08 ~ 0.1·Î ½ÃÀÛÇÏ´Â °ÍÀÌ Àû´çÇÏ´Ù. 10) 595 nm ¶Ç´Â 600 nm¿¡¼ÀÇ Èí±¤µµ¸¦ ±â·ÏÇϰí, À̷κÎÅÍ ´ë¼ö±â¿¡¼ÀÇ Generation timeÀ» °£Á¢ ÀûÀ¸·Î °è»êÇÑ´Ù.(Generation timeÀº Èí±¤µµÀÇ º¯È°¡ 2¹è µÉ ¶§±îÁö °É¸®´Â ½Ã°£ÀÌ´Ù.) ´Ù. ÄÝ·Î´Ï °è¼ö ¹æ¹ý 1) 30 ºÐ ¸¶´Ù ½Ã·á ¾à 1 mL¸¦ äÃëÇÏ¿© ¸ê±ÕµÈ Áõ·ù¼ö·Î 10-5, 10-7, 10-9·Î Èñ¼®ÇÑ´Ù. 2) Èñ¼®µÈ ½Ã·á 200 ¥ìL¾¿À» ¹Ì¸® ÁغñÇÑ LBÆòÆÇ¹èÁö 3À徿¿¡ Á¢Á¾ÇÑ ¿ì¿¡ 37¡É ¹è¾ç±â¿¡¼ ÇÏ·í ¹ã ¹è¾çÇÑ´Ù. 3) ´ÙÀ½ ³¯ ÀÚ¶ó³ ÄÝ·Î´Ï ¼ýÀÚ¸¦ ¼¼¾î ½Ã·á 1 mL´ç ¼¼±Õ ¼ö¸¦ ¹è¾ç ½Ã°£ º°·Î ±¸ÇÑ´Ù(¼¼ Á¾·ùÀÇ Èñ¼®¹è¼ö Áß¿¡¼ ÄÝ·Î´Ï ¼ýÀÚ°¡ ³Ê¹« ¸¹¾Æ¼ ¼¿ ¼ö ¾ø°Å³ª ¶Ç´Â ³Ê¹« ÀûÀº °æ¿ì¿¡´Â Á¦¿ÜÇÑ´Ù). ¡Ø °¢ ½Ã°£ º° ƯÁ¤ Èñ¼®¹è¼ö¿¡¼ÀÇ ½Ã·á 1 mL ´ç ¼¼±Õ¼ö = (Àüü ÄÝ·Î´Ï ¼ýÀÚ ¡À 3) ¡¿ 5 ¡¿ Èñ¼®¼ö ¡Ø ÁÖÀÇ »çÇ× - ½Ã°£ º°·Î ½Ã·á¸¦ äÃëÇÒ ¶§, ¹Ýµå½Ã ¹«±Õ Á¶ÀÛÀ» ÇÑ´Ù. - äÃë°¡ ³¡³ ¹èÁö´Â ¹Ù·Î ¹è¾ç±â¿¡ ³Ö¾î ½Ã°£À» ÁöüÇÏÁö ¾Êµµ·Ï ÇÑ´Ù. - ºÐ±¤±¤µµ°è¸¦ »ç¿ëÇÒ ¶§´Â ¹Ýµå½Ã ¸ê±ÕµÈ µ¿ÀÏ ¹èÁö·Î ¿µÁ¡ Á¶Á¤À» ÇÑ ÈÄ »ç¿ëÇÑ´Ù.
½ÇÇè °á°úÀÇ Ã³¸® °¡. Generation Time °è»ê 1) ¹è¾ç ½Ã°£¿¡ µû¸¥ ¼¼±Õ¼öÀÇ º¯È¸¦ ¹Ý´ë¼ö(Semi-log) ±×·¡ÇÁ ¿ëÁö¸¦ »ç¿ëÇÏ¿© ±×¸°´Ù. 2) Generation time(GT)À» °è»êÇÑ´Ù. GT = (t ¡¿ log2)/(logA - logB) A : ´ë¼ö »ýÀå±â µÎ ¹øÂ° ½ÃÁ¡¿¡¼ÀÇ ¼¼±Õ ¼ö B : ´ë¼ö »ýÀå±â ÇÑ ½ÃÁ¡¿¡¼ÀÇ ¼¼±Õ ¼ö t : A, B µÎ ½ÃÁ¡ »çÀÌÀÇ ½Ã°£ ³ª.Generation time ºñ±³ 1) Èí±¤µµ ÃøÁ¤À» ÅëÇØ ¾òÀº Generation Time°ú Äݸ®´Ï °è¼ö¹ýÀ¸·Î °è»êÇÑ Generation timeÀ» ºñ±³ ÇÑ´Ù. 2) ´ë¼ö±â¿¡¼ÀÇ Èí±¤µµ ±Õü¼öÀÇ »ó°ü °ü°è¸¦ ±×¸°´Ù.
|